头孢曲松与双黄连联用对细菌内毒素的影响研究 ,肺炎 克雷伯 机制

　　在抗生素治疗感染取得巨大进步的今天，由创伤及感染引起的性-反应性炎症综合征和脓毒症仍在困扰临床，其原因主要是抗生素治疗过程中容易耐药和细菌大量内毒素，这类患者的治疗难点在于拮抗内毒素的。本实验通过研究头孢曲松与双黄连联用对细菌内毒素的影响，为临床中、西抗菌药联用治疗严重感染提供理论依据。

　　1 材料

　　1.1 菌株

　　肺炎克雷伯菌CMCC(B)(医学院微生物教研室保存株)。

　　1.2 仪器

　　EDS-99细菌内毒素检测仪(天津通达科技发展有限公司)。

　　1.3 试剂

　　鲎试剂(安泰生物有限公司，批号：0);细菌内毒素工作标准品(中国药品生物制品检定所，批号：2007-01);细菌内毒素检查用水(安泰生物有限公司，批号：0);双黄连注射液(哈药集团制药二厂，批号：0);头孢曲松注射剂(山西新星制药有限公司，批号0)。

　　2 方法

　　2.1 标准菌株液的制备

　　铺MH琼脂板，将肺炎克雷伯菌接种于MH琼脂平板上，置培养箱中于35～36℃孵育过夜，挑取单个菌落接种于生理盐水中，麦式比浊后使含菌量约为0.5cfu/ml。

　　2.2 药物最小抑菌浓度(MIC)的测定

　　按二倍稀释法测得头孢曲松对肺炎克雷伯菌的MIC为0.6g/ml并且与实验浓度的双黄连合用时，其MIC无变化。

　　2.3 标准曲线的绘制及可靠性试验

　　用内毒素检查用水对细菌内毒素工作标准品进行稀释，使其细菌内毒素最终浓度分别为5.00、0.50、0.05EU/ml，各取0.10ml分别加到预先加有0.10ml鲎试剂的反应管内混合均匀，插入EDS-99细菌内毒素检测仪内进行检测。每一浓度平行测定两管，并做阴性对照两管。按照2005年《中国药典》要求绘制标准曲线。

　　2.4 内毒素实验

　　配制高、低浓度(30、1倍MIC)的头孢曲松溶液，高浓度的头孢曲松溶液与实验浓度的双黄连配伍，加入肺炎克雷伯菌使菌量为0.5cfu/ml，同时配制不加抗菌药的标准菌溶液并作为对照，然后置于35～37℃培养箱中培养5h，取出样品各稀释1000倍，按动态比浊法鲎试验测其内毒素的量，每一浓度平行测定两管，试验3d操作一次，共3批。

　　3 结果

　　低浓度组的头孢曲松产生的内毒素量最大，高浓度组的头孢曲松产生的内毒素量较小，高浓度组的头孢曲松联合双黄连产生的内毒素量最小。见表1。表1 不同浓度抗菌药物对肺炎克雷伯菌内毒素的影响(略)

　　4 讨论

　　内毒素的定量测定方法有终点显色法、动态比色法和动态比浊法3种。动态比浊法是目前最灵敏、准确的内毒素定量测定方法[1]。2005年版《中国药典》内毒素定量测定回收率在50%～200%认为没有干扰，本试验经干扰预实验，样品稀释2000倍后，其加样回收率在(10015)%之内。

　　抗菌药物细菌内毒素与抗菌药物杀菌机制不同有关，头孢曲松属于第三代头孢菌素，第三代头孢菌素的特点是对革兰阳性菌有一定抗菌活性，对革兰阴性菌有较强抗菌活性，通过细菌细胞壁的合成，致使细菌细胞破裂而死亡[2]。双黄连是由金银花、黄芩、连翘3种中药提取而成，具有清热解毒、燥湿等功效，临床上常用于病毒性肺炎、呼吸道感染等病毒及细菌感染性疾病的治疗。双黄连与头孢曲松联用比单用头孢曲松产生的内毒素量小，说明双黄连具有体外拮抗和细菌产生内毒素的作用。